二維液相色譜(2DLC)就是將分離機理不同但又相互獨立的兩支色譜柱串聯起來構成的分離系統。樣品首先經過di一維的色譜柱進入接口，通過濃縮、富集或切割后被切換進入到第二維色譜柱和檢測器。
二維分離采用兩種不同的分離機理分離樣品，即利用樣品的兩種不同特性把復雜混合物分離成單一組分，這些特性包括極性差別、分子量、基團差別、空間構形、酸堿性等，將具有不同分離效果的色譜分離模式進行組合，使復雜體系的樣品在一維系統中不能分離的組分可能在二維系統中得到更好的分離，與一維系統相比，分辨率和分離能力都能得到很大的提高。
根據di一維餾分是否直接轉移到第二維，可把二維色譜分為離線(off-line)和在線(on-1ine)兩種模式，離線模式對儀器的要求相對低，但是操作起來耗時耗力，難以實現自動化和重復性，并且在樣品處理過程中由于人為操作容易產生樣品的損失和污染。在線模式操作快，重復性好，可以避免人為誤差，提高樣品分析速率，具有更高的分離效率，但是對儀器設備的要求較高。
按照di一維的餾分是否全部進入第二維，又可將其分為中心切割(heartcutting)二維液相色譜和全二維(comprehensive)液相色譜，前者是將di一維色譜柱分離出的某個或者某些目標組分轉移到第二維進行繼續分析，適合目標組分的分析；后者是將di一維的餾分全部進入到第二維進行分離，主要通過在線二維液相色譜來實現。
基于不同的分離目的，可以采用不同分離機理來構建二維液相色譜分離系統，例如，反相色譜(RPLC)、正相色譜(NP)、離子交換色譜(IEX)、親和色譜(AC)、尺寸排阻色譜(sEc)等分離模式。
我們常用反相色譜與正相色譜，而親水色譜(HILIC)是被認為是正相色譜(NP)的替代選擇，HILIC模式使用的梯度和反相模式相反。初始條件包括高比例有機相，典型的濃度是95%有機相如乙腈或甲醇，然后逐步降低到水相。
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